Question/Réponse en Western Blot : aucune bande obtenue
QUESTION / RÉPONSE TECHNIQUE
QUESTION
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Je travaille sur des protéines de haut poids moléculaire en Western blot, l’une fait environ 150 KDa et l’autre 500 KDa. Dois-je suivre un protocole spécial ?
RÉPONSE
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Cell Signaling Technology (CST) utilise un protocole spécial pour les protéines de plus de 200 kDa. Dans le cas d’une protéine de150 kDa, ce n’est pas nécessaire.

Pour les protéines de plus de 200 kDa, on utilise des gels Tris-Acétate 3-8 % avec un tampon de migration Tris-Acétate-SDS à pH neutre. Cela permet d’avoir une meilleure résolution et une détermination de poids moléculaire plus précise vers 500 kDa comparé à un système Tris Glycine.
En complément, on recommande un transfert d’au moins 2-3 heures avec 10 % de méthanol dans le tampon de transfert au lieu des 20 % habituellement utilisés. Cela augmente l’efficacité de transfert des grosses protéines.